Clínicament sol, és a dir, sobre la base de sífilis símptomes, ja que no es pot fer el diagnòstic símptomes de sífilis poden variar molt i no són específics. Per tant, és microscòpic i serològic sífilis s’ha de realitzar la prova. No és possible conrear el bacteri T. pallidum en un medi de cultiu. En el diagnòstic microscòpic del sífilis a la prova, s’extreu un frotis de la pell i de les membranes mucoses i s’examina la secreció obtinguda amb un microscopi de camp fosc. Sota un microscopi òptic normal els bacteris no es poden detectar perquè són massa prims. A més de l'estructura típica, el petit diàmetre, fins i tot les bobines, la flexió ràpida i estirament és característic el moviment al centre del cos bacterià. Un resultat positiu de la prova és l’evidència de la malaltia, però un resultat negatiu no exclou la sífilis. En el diagnòstic serològic es realitzen proves de detecció d’anticossos que són positives 2-4 setmanes després de la infecció. Anticossos es detecten que s’han format contra antígens a la superfície del patogen els bacteris. La prova TPHA (prova d’hemaglutinació de T. pallidum, avui també anomenada prova TPPA) és una reacció de cerca sensible i molt específica en què anticossos contra T. pallidum cúmul (aglutinat) vermell sang cèl · lules (eritròcits) carregat amb antigen de T. pallidum. Es torna positiu la segona setmana després de la infecció per sífilis i continua sent així durant molts anys després que la malaltia s’hagi curat (“seronar”). A la primera etapa primària encara pot ser negativa. La prova s'utilitza en casos de sospita de sífilis, però també per al cribratge rutinari primerenca gestació, De sang donants i conserves de sang. Els resultats positius requereixen una prova de confirmació: a la prova FTA-ABS (Fluorescence Treponema Antibody Absorption Test) els bacteris es fixen en una diapositiva i es reuneixen amb sang sèrum, la part líquida de la sang. El anticossos al sèrum sanguini s’uneixen als antígens dels bacteris. Després d’esbandir el sèrum, els anticossos tornen a marcar-se amb altres anticossos que porten un colorant fluorescent. Sota el microscopi de fluorescència, els anticossos buscats contra els bacteris es fan així visibles. La prova FTA-ABS, igual que la prova TPPH, és positiva la segona setmana després de la infecció i continua sent positiva en el sentit d’una cicatriu de seró anys després de la curació clínica. La prova VDRL (Venereal Disease Laboratory Test), també coneguda com a prova de floculació de cardiolipina, s’utilitza per a la teràpia i el progrés monitoratge. Aquesta prova de sífilis s’utilitza per a la detecció d’anticossos específics de lípids, que retrocedeixen a mesura que les manifestacions de la pell es curen. La cardiolipina és un antigen extret de la cor de bestiar i lligat a colesterol partícules. Les partícules carregades s’uneixen amb el sèrum del pacient. En el cas positiu, es produeix floculació (aglutinació). Aquesta prova esdevé positiva 4-6 setmanes després de la infecció o 1-3 setmanes després que es produeixi l'efecte primari. La quantitat d’anticossos específics de lípids disminueix ràpidament a mesura que els símptomes externs de la sífilis es curen i ja no estan presents després d’un tractament reeixit. Aquesta quantitat (títol) es pot utilitzar per avaluar si la teràpia va tenir èxit o si la sífilis es va tractar insuficientment. Tot i així, la prova de VDRL també pot ser positiva per a altres malalties, per la qual cosa és característica de la sífilis, però no és específica. Es fa una prova de LCR per confirmar la neurosífilis en pacients amb símptomes neurològics de sífilis i per detectar o excloure la neurosífilis asimptomàtica. Només els anticossos en el LCR que també s’han produït al SNC demostren la neurosífilis, però no els anticossos que han migrat del sèrum al LCR. Això es pot determinar comparant els títols d’anticossos en LCR i sèrum. Si la proporció del títol del LCR amb el títol sèric supera 2, se sospita que hi ha neurosífilis. La sífilis es pot manifestar de moltes maneres diferents, especialment la símptomes de la pell pot ser molt diferent: "La sífilis és el mico entre les malalties de la pell", és a dir, pot falsificar gairebé qualsevol malaltia de la pell. De vegades es confon amb Roseola syphilitica exantema de fàrmacs, que és el resultat de intolerància a les drogues. El dolorós úlcera molle, causada pel bacteri H. ducreyi, i altres canvis de pell causades per infeccions (per exemple, granuloma venerum) s'ha de distingir de la úlcera dur.
