La hibridació in situ és un mètode per detectar aberracions cromosòmiques. Implica un etiquetatge específic cromosomes amb flouroscent colorants i unint-los a una sonda d'ADN. Aquesta tècnica s’utilitza per al diagnòstic prenatal de mutacions genètiques.
Què és la hibridació in situ?
La hibridació in situ implica etiquetatge específic cromosomes amb flouroscent colorants i unint-los a una sonda d’ADN. Aquesta tècnica s'utilitza per al diagnòstic prenatal de general mutacions. Hibridació in situ o hibridació in situ de fluorescència implica la detecció genètica molecular de àcids nucleics a partir d’ARN o ADN en teixits específics o en una cèl·lula. Normalment, aquest tipus de diagnòstic s’utilitza per detectar una anomalia cromosòmica estructural o numèrica a embaràs. Amb aquest propòsit, s’utilitza una sonda produïda artificialment, que consisteix en àcid nucleic. A continuació, s'uneix al àcids nucleics a l’organisme per aparellament de bases. Aquesta unió es coneix amb el terme hibridació. La detecció es realitza sobre l'estructura viva del pacient i, per tant, correspon a la detecció in situ. D’això se’n distingeixen els mètodes in vitro, en què la detecció té lloc a la proveta. El mètode va ser desenvolupat al segle XX pels científics Joe Gall i Mary Lou Pardue. La tècnica ha evolucionat des de llavors. Per exemple, mentre es feien servir sondes radioactives llavors, les sondes marcades amb fluoroscència amb un enllaç covalent a l’etiquetatge molècules s’utilitzen avui en dia.
Funció, efecte i objectius
La hibridació in situ se sol utilitzar per detectar aberracions cromosòmiques, anomalies cromosòmiques que no es poden detectar en un cariograma. Per tant, el mètode sempre s’utilitza quan s’han de determinar les malalties hereditàries durant embaràs. Atès que les aberracions cromosòmiques són un problema que avui no s’ha de subestimar, l’aplicació del mètode ha augmentat amb el pas del temps. La hibridació es realitza mitjançant cèl·lules natives de la mare líquid amniòtic. La base de la tècnica és la unió de la sonda marcada amb colors a fragments d’ADN. Gràcies a l’enquadernació, posteriorment es pot utilitzar un microscopi per avaluar el nombre de còpies, ja que les còpies individuals emeten un senyal de llum i, per tant, es poden fer visibles al microscopi. Hi ha diferents procediments per a això. O bé l'anàlisi es realitza immediatament després de l'enllaç. En aquest cas, un colorant de fluoroscència com biotina s’utilitza, que s’uneix directament a la sonda d’ADN. En el mètode indirecte d’hibridació in situ, l’anàlisi no es pot realitzar immediatament després de la hibridació perquè les substàncies fluorescents només es poden unir a la sonda després de la hibridació. Aquest mètode indirecte és més utilitzat que el mètode directe perquè es considera més sensible. Les tècniques inclouen sondes d’ADN centròmetres específiques per a cromosomes, sondes d’ADN específiques de locus, sondes de biblioteca d’ADN específiques per a cromosomes i hibridacions comparatives del genoma. Les sondes d’ADN del centròmer específiques del cromosoma es poden utilitzar per detectar anomalies numèriques cromosòmiques. És a dir, s’utilitzen principalment quan es dupliquen o esborren cromosomes se sospita. Les sondes d'ADN específiques del locus són adequades principalment per a la detecció de mutacions mínimes que no es poden detectar al cariograma. Una sonda de biblioteca d’ADN específica per a un cromosoma s’utilitza en particular per detectar insercions i translocacions. La hibridació comparativa del genoma, en canvi, és una anàlisi completa de les pèrdues i guanys en material cromosòmic. Avui en dia, la hibridació in situ té una gran importància en el diagnòstic de diverses mutacions cromosòmiques. Al diagnòstic de Síndrome de Down, per exemple, les sondes s’uneixen al cromosoma 21. Per a aquest propòsit, s’utilitzen normalment sondes específiques cromosòmiques, que es poden aplicar en casos de sospita d’aquesta malaltia. Pot sorgir una sospita, per exemple, si els pares han donat a llum prèviament un fill amb la malaltia i la malaltia ultrasò la imatge és ben visible. Si hi ha un triple empat que un doble empat, donant lloc a un triple senyal de color, es considera confirmat el diagnòstic.
Riscos, efectes secundaris i perills
A diferència de la PCR, per exemple, la hibridació in situ és molt menys susceptible a la contaminació. A més, el temps necessari per al procediment és immensament menor, però, atès que els embrions en particular formen patrons cromosòmics, qualsevol patró present no es pot utilitzar per inferir amb certesa la resta del cromosòmic. i, per tant, l’estat genètic d’altres cèl·lules. Els senyals de color també es poden superposar o mantenir invisibles per altres motius. Per tant, la hibridació in situ com a eina de diagnòstic durant embaràs és relativament propens a l’error. Es poden produir diagnòstics erronis i els pares poden decidir contra una persona sana embrió. Per reduir la probabilitat d'error de la hibridació in situ, s'haurien d'examinar almenys dues cèl·lules embrionàries simultàniament. En examinar dues cèl·lules en paral·lel, ara només hi ha un risc insignificant de diagnòstic erroni. Per tant, els pares poden confiar en el diagnòstic en aquest cas. La hibridació in situ no s’ofereix a totes les dones embarassades, sinó només a les dones d’un grup de risc. No obstant això, a les dones embarassades no se'ls nega aquest tipus de diagnòstic a petició pròpia. Anormal ultrasò les troballes o un sèrum anormal poden incitar un metge a oferir el procediment de diagnòstic. Avui en dia, la hibridació in situ es pot utilitzar per diagnosticar una gran proporció d’aberracions cromosòmiques, però en cap cas totes. Per tant, la hibridació in situ no s’ha de realitzar mai sola, sinó que s’ha d’utilitzar sempre conjuntament amb una prova convencional de cromosomes. La cura de la dona embarassada té un paper important en aquest procediment. Per tant, abans de l’anàlisi, es produeix una discussió exhaustiva sobre el mètode diagnòstic amb la futura mare, informant-la sobre els riscos, les possibilitats i les limitacions de la tècnica.
